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植物过氧化物酶(POD)酶联免疫分析试剂盒技术参数

点击次数:97 发布时间:2020/3/6
提 供 商: 上海研生生化试剂有限公司 资料大小:
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植物过氧化物酶(POD)酶联免疫分析试剂盒说明书

本试剂盒仅供研究使用。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物过氧化物酶(POD)水平。用纯化的植物过氧化物酶(POD)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入过氧化物酶(POD),再与HRP标记的过氧化物酶(POD)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的过氧化物酶(POD)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物过氧化物酶(POD)活性浓度。

植物过氧化物酶(POD)酶联免疫分析试剂盒组成

130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶

2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(48mU/L)0.5ml×1瓶

3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶

4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份

5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张

6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

植物过氧化物酶(POD)酶联免疫分析试剂盒操作步骤

1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

24mU/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

12mU/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

6mU/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

3mU/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

1.5mU/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

植物过氧化物酶(POD)酶联免疫分析试剂盒注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zuihao控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,zuihao做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔diyi孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:2-8℃。

2.有效期:6个月

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