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人B族链球菌抗体(Strep-B Ab) 酶联免疫分析 试剂盒实验原理 |
点击次数:481 发布时间:2019/8/30 |
提 供 商: |
上海研生生化试剂有限公司 |
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人B族链球菌抗体(Strep-B Ab) 酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 96T 使用目的: 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中 B 族链球菌抗体(Strep-B Ab) 表 达。 实验原理 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人 B 族链球菌抗体(Strep-B Ab) 表达。用纯化的 抗原包被微孔板,制成固相抗原,可与样品中 B 族链球菌抗体(Strep-B Ab) 相结合,经 洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原 复合物,经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸 的作用下转化成*终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),与 CUTOFF 值相比较,从而判定标本中人 B 族链球菌抗体(Strep-B Ab) 的存在与否。 试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶 2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 阳性对照 0.5ml×1 瓶 3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 阴性对照 0.5ml×1 瓶 4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份 5 显色剂 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个 标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 人B族链球菌抗体(Strep-B Ab) 酶联免疫分析 试剂盒操作步骤 1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1 孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不 触及孔壁,轻轻晃动混匀, 3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。 4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。 7. 温育:操作同 3。 8. 洗涤:操作同 5。 9. 显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15 分钟. 10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。 操作程序总结: 计算和结果判定: 试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10 临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15 阴性判定:样品 OD 值< 临界值(CUT OFF)者为 B 族链球菌抗体(Strep-B Ab) 阴 性 阳性判定:样品 OD 值≥ 临界值(CUT OFF)者为 B 族链球菌抗体(Strep-B Ab) 阳 性 。 注意事项 1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。 2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。 3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 5.底物请避光保存。 6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为 630nm 7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸,使用时必须 注意安全。 人B族链球菌抗体(Strep-B Ab) 酶联免疫分析 试剂盒保存条件及有效期 1.试剂盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6 个月 |
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