人抑瘤素M（OSM）ELISA试剂盒使用说明书

人抑瘤素M(OSM)ELISA试剂盒实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。 往预先包被人抑瘤素M（OSM）
捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。
颜色的深浅和样品中的人抑瘤素M（OSM）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 
值），计算样品浓度。 
样本处理及要求
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，
或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 
2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，
或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 
3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃
或-80℃保存，但应避免反复冻融。 
注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 
人抑瘤素M(OSM)ELISA试剂盒注意事项
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室
温 20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。 
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中
不要让微孔干燥掉。 
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响 OD 值。 
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。 
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。 
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。 
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。 
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏
试剂盒中反应试剂的生物活性。 
9. 不能使用过期产品。 
10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。 
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。 
操作步骤
1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。 
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL； 
3.样本孔中加入待测样本 50μL；空白孔不加。 
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体
100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。 
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸
上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。 
6.每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 
7.每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。 
实验结果计算 
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘
制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。 
试剂盒性能
1.检测范围：10 pg/mL – 320 pg/mL。 
2.灵敏度：zui低检测浓度小于 1.0 pg/mL。 
3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 
4.人抑瘤素M(OSM)ELISA试剂盒重复性：板内变异系数小于 10% ，板间变异系数小于 15% 。