猪ELISA试剂盒

猪ELISA试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。用纯化的
猪肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次
加入肿瘤坏死因子α（TNF-α），再与HRP 标记的肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体结合，
形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催
化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子
α（TNF-α）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计
算样品中猪肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶
2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（800pg/ml） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份
5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张
6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
猪肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA试剂盒操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
400pg/ml 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
200pg/ml 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
100pg/ml 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
50pg/ml 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
25pg/ml 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。