一站式DNA尿素-PAGE电泳套装
产品及特点本产品是专门用于DNA尿素-PAGE电泳的一站式试剂盒，它具有下列特点:
1.一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。用户不需要单独准备各种成分。
2.可用于DNA测序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase保护实验等。
3.安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。
4.电泳后可直接用于银染、EB染色等实验。
规格及成分成份30次大纸盒包装
电泳级尿素（100873）210 g
电泳级丙烯酰胺（100876）60 g
电泳级甲叉双丙烯酰胺（100877）3 g
10×TBE 电泳液（90313）250 mL
电泳级TEMED（100880）1.5 mL
电泳级过硫酸铵（100879）1 g
2×尿素-PAGE上样液（100874）1 mL
使用手册1份 运输及保存常温运输，保存条件见上表，有效期一年。
自备试剂去离子水
使用方法一、PAGE浓度和交联度的选择指南
尿素-PAGE一般推荐用29：1（丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺）的交联度，在此条件下，DNA片段和zui适PAGE浓度对应关系如下：
单链DNA长度*PAGE浓度二甲苯青FF迁移率对应的长度溴酚蓝的迁移率应的长度
50-400 nt8%160 nt45 nt
200-1000 nt5%260 nt65 nt
750-2000 nt3.5%460 nt100 nt 二、制备尿素-PAGE胶
1.配制尿素-PAGE胶（这是配制100 mL胶的用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加）
A：新鲜配制10%的APS（过硫酸铵）：按每0.1克过硫酸铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的1.5 mL EP管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鲜交联度为29：1的40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液（AB溶液，下同）：在装有60g电泳级丙烯酰胺干粉的瓶中加入约130 mL自备的去离子水，然后将全部甲叉双丙烯酰胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有毒粉末飘出。甲叉双丙烯酰胺溶解度低，不会溶解在这少量溶液中）。充分摇晃混匀后所得溶液即40%的AB溶液。配制40%而非30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
B：配尿素-PAGE胶：在一个250 mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去离子水、40%AB溶液和10×TBE缓冲液。丙烯酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
PAGE
胶浓度各成分用量（尿素为克，其余单位是mL）补水到
（mL）
尿素40%AB溶液10×TBE
缓冲液
5%4212.55.0100
6%4215.05.0100
7%4217.55.0100
8%4220.05.0100
9%4222.55.0100
10%4225.05.0100
11%4227.55.0100
12%4230.05.0100
C：搅拌溶解，然后用滤纸过滤。能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应），无条件也可以不脱氧。
D：加入500uL 10%APS和100uL TEMED，迅速摇匀后倒胶。
E: 在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
F: 室温聚合30-60分钟（低温抑制聚合反应）。
G: 拔出梳子，用0.5×TEB液冲洗加样孔。
三、样品准备
2.对一般样品、测序样品、微卫星DNA、AFLP样品、DDRT样品、RPA样品：将样品跟上样液1:1混合，95℃ 3分钟变性，然后放冰上待用。
3.对TGGE样品：可以直接上样。
四：电泳
4.将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够0.5×TEB电泳液。
5.预电泳5-30分钟将冰上放置的样品上样。
6.连接电源线，打开电源开关。根据胶的大小选择功率（固定功率可以固定产热，这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压，产热都将随电泳时间而变化，不好控制）。
对小胶一般用5-6W固定功率，大胶用15-25W固定功率。
7.终止电泳，取出凝胶进行后续的处理（如银染）。注意：如果银染，必须延长固定时间以便让洗出尿素，否则残留尿素会干扰后面的银染。
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