大提柱式真菌DNAout 产品及特点 本产品在天泽基因柱式真菌DNAout(CAT#:70901)基础上改良而的的大提升级产品,主要用于大量快速从各种真菌材料中提取基因组DNA。跟柱式真菌DNAout相比,它具有下列特点: 1. 处理量大,一次可以处理1-3g各种真菌组织。 2. 纯度高,OD260/280一般在1.8以上。不含污染和抑制剂,得到的DNA可以不经稀释直接用于酶切、PCR、real-timePCR、multiplex PCR、RAPD、RELP、AFLP、Southern Blotting,microsalite analysis等各种后续分子生物学实验。 3. 产率一般在10-100ug/g真菌样品。离心吸附柱zui大吸附量为800ug。 4. DNA 片段长度一般在20-40kb左右。 5. 适用范围广,适用于度大多数真菌材料,包括酵母(S.cerevisiae、S.pomb、Pichia pastoris)等。 规格及成分 成份 4次包装(CAT:80926-4) 溶液A 100 mL 溶液B 0.5 mL 溶液C 100 mL 溶液D 125mL 大提离心吸附柱 4 套 通用洗柱液 200 mL 通用洗脱液 5 mL 使用手册 1份 运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。溶液B含破壁酶成分,需要-20℃保存 自备试剂 无。 使用方法 1. 称取1-3g湿的真菌菌丝、孢子、子实体或10-30mL真菌细胞沉淀,转移到塑料研钵中,液氮研磨成粉后转移到一个干净的50mL 塑料离心管中。 注意:避免使用含二氧化硅的玻璃研钵,因为DNA会吸附在表面,影响得率。如果菌丝或子实体等已经十分干燥,则使用量比上面推荐的使用量低5-10倍;如果需要预先从环境中对真菌进行纯化(如从血液病原真菌中提取DNA,则需要先去除红细胞等成份,具体方法请参考相关文献和相关产品的使用手册,如红细胞裂解液)。 2. 在离心管中加入10 mL 65℃预热的溶液A和100uL溶液B并用移液枪头充分吹打混匀(如果溶液A有沉淀,需先在65℃加热溶解后摇匀再使用)。 3. 65℃保温5-10分钟,其间吹打混匀2-3次。 4. 12000-15000 g室温离心5分钟。 5. 将上清转移到新的50mL离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物,但对后续操作没有影响,不必进行特殊处理。 6. 在上清液中加入等体积的溶液C,上下颠倒30秒充分混匀,溶液将呈白色混浊状。 7. 将其置于冰浴中放置5-10分钟。 8. 12000-15000 g室温离心5分钟,转移上清到新的50 mL塑料离心管中。 9. 加入1.5倍体积(和总体相比)的溶液D,混匀后转移到大提离心吸附柱中。 10. 室温放置5分钟。 11. 12000-15000 g室温离心5分钟,弃穿透液。 12. 将25 mL通用洗柱液加入离心柱,室温离心1分钟,弃穿透液。 13. 重复12步一次。 14. 空甩1分钟去除残留液体。 15. 将离心柱放置在一新的50 mL塑料离心管中,加入1mL DNA洗脱液。 16. 室温放置5分钟后离心1分钟,管底即为真菌DNA溶液,可立即使用,也可长期保存在-20℃。 17. 可以重复上步一次,以洗脱更多的DNA。 |