柱式细菌RNAout
产品及特点 本产品是天净沙细菌RNAout （CAT#:51102）的柱式升级产品，用于快速从各种常见的革氏阴性和革氏阳性细菌中提取总RNA。跟细菌RNAout相比，它具有下列特点:
1. 操作更加简单快速，省去了zui费时的离心步骤。
2. 所得RNA纯度更高，OD260/OD280一般在2.0左右.
3. 一般不含基因DNA污染。
4. 适用于各种革氏阴性和革氏阳性细菌。
5. 性价比高于进口同类产品。
规格及成分 成 份 50次包装
溶液A 30 mL
溶液B 20 mL
离心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
RNA洗脱液 10 mL
使用手册 1份 运输及保存 常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂 。
使用方法 下面的操作步骤是针对在1.5 mL塑料离心管中进行的微量提取的。
1. 新鲜配制裂解液。将溶液A和溶液B按1:1的比例混合。注意：溶液A和溶液B混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。一次处理1.5mL左右的细菌需要0.6mL新鲜配制的裂解液（即0.3mL溶液A和0.3mL溶液B的混合液）。
2. 在1.5 mL塑料离心管中离心收集0.2-1.5 mL新鲜细菌。注意:由于细菌RNA半衰期十分短，所以，必须使用鲜的、处于对数生长期的细菌。
3. 吸尽液体培养基，加入0.6mL新配制的裂解液，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细菌全部裂解，没有块状物。
4. 将裂解物转移至一个干净的1.5 mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备（1 mL裂解物需0.2 ml），振荡器上充分振荡混均30秒。
5. 12000-15000 g室温离心3-5分钟。
6. 将上清液（约0.6-0.8 mL）转移到离心吸附柱中。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100 uL上清液不取。同时吸取上清时缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
7. 12000-15000 g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
8. 加0.7 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品OD260/280比值不高，可以再用0.3 mL通用洗柱液重复此步一次。
9. 室温12000-15000 g离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
10. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free收集管中，加入50-100 uL RNA洗脱液。
11. 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
12. RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。
13. RNA产量产率测定：将5-10 μL RNA溶于TE缓冲液中（pH7.5-8.2之间）检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积）和产率（RNA产量/组织用量）。
14. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间（具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关），高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。
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