赭曲霉毒素（OT）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 药品名称： 通用名：赭曲霉毒素（OT）酶联免疫诊断试剂盒 使用目的： 本试剂盒用于测定组织，细胞及其它相关样本中赭曲霉毒素（OT）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中赭曲霉毒素（OT）水平。用纯化的赭曲霉毒素 （OT）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入赭曲霉毒素（OT） 抗原，再与 HRP 标记的赭曲霉毒素（OT）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经 过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转 化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的赭曲霉毒素（OT）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中赭曲霉毒素（OT）抗原浓度。 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在*、第二孔中分别加标 准品 100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从*孔、第二 孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl， 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各 取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混 匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准 品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl， 浓度分别为 180ng/L，120ng/L，60ng/L，30ng/L，15ng/L）。 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样 品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混 匀。 3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。 4.配液：将 25 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 25 倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同 3。 8.洗涤：操作同 5。 9.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟. 10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值 大于标准品孔的*孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定， 计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 检测范围： 10ng/L -200ng/L 规格： 96 人份/盒 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6 个月 赭曲霉毒素（OT）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书 |
