细菌分离纯化 培养基配制 1. 用来称量酵母膏,海水晶的烧杯和溶解药品的铁杯,玻璃棒记得要用蒸馏润洗。 2. 如果没有陈海水,就用海水晶配,浓度在2~3%之间。一般我们选择2.5% 3. 记得要在加琼脂粉之前调PH值到7。6~7。8 4. 配2216E培养基要用“纯化琼脂粉(细菌级)” 5. 配好培养基要及时灭菌,分装时用500ml锥形瓶装200ml培养基,不宜装得过多,因为该培养基容易沸腾。 6. 分装用的锥形瓶也要预先配制。
涂布平板 1. 提前灭好涂棒,无菌水。 2. 涂布是加0.1Ml 样液,再根据平板的干燥程度加无菌水或灭过菌的生理盐水,涂6~10圈后样液和水都能被吸收,一般加无菌水的量在100~500ul之间。所选平板是已预先放置了2天左右。 3. 涂布时可预先灼烧另一根涂棒,放在一边冷却。 4. 平板要到扣培养。 5. 合理选择稀释度
倒平板 1. 如果要准备大批量的平板,一定要先确定有足够的已灭菌的培养皿。 2. 如不能及时倒,可将冷凝后的培养基再次加热化开,稍冷却后倒平板。 3. 倒好的平板在无菌室先放一段时间让它冷凝,如果有大批量平板,在晚上倒平板,第二天早上再收好。这样就不会影响其他人使用无菌室。 4. 平板不宜太干也不宜太湿。若太湿,可将平板放到无菌室,若太干,可将平板用塑料袋包住并放在阴凉处,以减少水分的蒸发。 5. 未使用的平板不与已使用的平板放在一处,因为这样染菌的几率就会增大。 6. 如果有条件,可以将平板放在培养箱里预培养1~2天,筛选掉长杂菌的平板。
计数 1. 可用描点法计数,即数一个菌落,就在该菌落上点一个小圆点。 2. 如果平板上的菌落数太多,可计数平板的一半或4分之一,再乘以相应的倍数。
转接划线 1. 如果要挑的菌落很小,而且又长得慢,菌落全部粘到接种环上,划线时可适当增加第二梯度线的宽度和划线数,因为当菌少时,拉不开4个梯度,而第二梯度可较好的分离出单菌落。 2. 如果要挑的菌落很大,而且又长得快,可挑菌少些,*梯度线要多划几下,且占地要小。第二梯度线划得少且密一些,第三和第四梯度线则划得多且疏,因为这些菌主要靠第三和第四梯度线分离单菌落。第二梯度2~3条线与*梯度线连接,第三与第二梯度线也是2~3条线连接。在第二与第三梯度划线前将接种环灼烧冷却,这样可烧死粘在接种环上的细菌。 3. 接种环可用两个轮流划,一个在划时另一个就可以放在一边冷却。 4. 如果平板是用来计数的,则将字写在培养皿的盖子上。 5. 经常观察平板的长势,当菌落长的差不多时就将他从培养箱中拿出 ,防止菌落长得太快,单菌落连在了一起。 |