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人转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒说明书 |
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点击次数:784 更新时间:2011-10-25 |
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药品名称: 通用名: 人转化生长因子β1(TGF-β1)酶联免疫分析试剂盒 使用目的: 本试剂盒用于测定人血清、血浆、或其它组织液中转化生长因子β1(TGF-β1)含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人转化生长因子β1(TGF-β1)水平。用纯化的人转化生长因子β1(TGF-β1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子β1,再与HRP 标记的羊抗人抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人转化生长因子β1(TGF-β1)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人转化生长因子β1(TGF-β1)浓度 试剂盒组成: 1、20倍浓缩洗涤液30ml×1瓶7终止液6ml×1瓶 2、酶标试剂6ml×1瓶8标准品(900ng/L)0.5ml×1瓶 3、酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液2ml×1瓶 4、样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份 5、显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张 6、显色剂B液6ml×1瓶12密封袋1个 标本要求: 1.标本采集后尽早进行实验。 2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 3.可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。 操作步骤: 1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10 孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉,再各取50μl 分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各 取50μl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为(600 ng/L,400ng/L ,200ng/L,100 ng/L,50 ng/L)。 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 4.配液:将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水20 倍稀释后备用 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7.温育:操作同3。 8.洗涤:操作同5。 9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。 计算: 以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 注意事项: 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔*孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5. 严格按说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准 6.底物请避光保存。 7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9.本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。 检测范围: 30ng/L -800 ng/L 规格: 96 人份/盒 保存条件及有效期 1.试剂盒保存:2-8℃。 2.有效期:6 个月 |
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