PCR核酸检测试剂盒
  定量PCR试剂盒
  ELISA试剂盒
  elisa检测试剂盒
  细胞
  生化试剂
  标准品对照品
  科研抗体
  科研细胞株
  生物耗材
  生物培养基
  生化检测试剂盒
  生物耗材、仪器
  免疫组化试剂盒
  BD耗材
  分子生物学试剂盒
  放免试剂盒
  金标法检测试剂盒
  食品检测试剂盒
  Western Blot
  微囊藻毒素
  fbs 胎牛血清
  免费代测ELISA服务
  TSZ elisa试剂盒
  RD elisa试剂盒
  IBL elisa试剂盒
  日本WAKO和光纯药
  *原时间试剂
  免疫组化代测服务
  质粒
  PCR试剂盒
  生化试剂盒
  试剂盒
  蛋白质生物学
  对照品
  生理生化检测试剂盒
  细胞培养
 
 
荧光PCR的分析方法

点击次数:1117 更新时间:2011-05-19
 

对荧光定量PCR结果的分析方法分为两种:定量分析法和相对定量分析法。

1、定量分析方法,起始浓度的对数跟循环数的线性关系,标准曲线由已知拷贝数的标准品绘制,根据样品的Ct值,可求样品的模板量。

(1)标准品的制备:

1V的样品原液(i)+9V稀释缓冲液,得到ii;

1V的ii +9V稀释缓冲液,得到iii;

1V的iii + 9V稀释缓冲液,得到iv;

1V的iv +9V稀释缓冲液,得到v。

(2)拷贝数的计算:待测样本浓度(ng/ul)=OD260×40*稀释倍数

样品分子量+碱基数×324

待测样本拷贝数=待测样本浓度/样本分子量×6×1014

从扩增数据得到循环数,通过标准曲线,我们可以求出样品的拷贝数。

2.相对定量分析方法:

其又可有双标准曲线法和双Ct法。所谓相对,就只是实验前后结果的对比,反映了反应前后的数据的差值。

(1)双标准曲线法,分析简单,但是对于每一个基因,每一轮实验都需要做标准曲线,而且必须有特定的标准品作标准曲线,这样的标准品不代表样品扩增的真实状态。这种方法常用于基因表达调控。

F=待测样品目的基因浓度/待测样品参照基因浓度÷对照样品目的基因浓度/对照样品参照基因浓度

(2)双Ct法,此方法不用对看家基因和目的基因做标准曲线,而只需要对待测样品分别进行PCR扩增即可,标准曲线的差值<0.1.假若扩增效率为100%或标准曲线及每次扩增之间的效率都保持一致,这样实验条件优化较难为复杂。这种分析方法较长用于基因表达调控研究中。


 

 
上海研生生化试剂有限公司 版权所有 总访问量:875963 地址:上海市嘉定区澄浏公路52号
电话:021-59989018 手机:15201736385 联系人:王小姐 邮箱:3004965319@qq.com
GoogleSitemap ICP备案号:沪ICP备11012944号-8

智能制造网

推荐收藏该企业网站