一、前置准备

试剂耗材：试剂盒配套冻干总胆固C标准品、‌专用样本稀释液‌（严禁用PBS、洗涤液替代，保证基质与待测血清样本匹配）、无酶1.5mL离心管、校准后的单道移液器、滤芯枪头、涡旋仪、离心机、冰盒。

标准品预处理：提前30分钟将冻干标准品从-20℃取出回温，6000-10000rpm离心30秒，让管壁/管盖附着的粉末沉底，避免后续浓度损失。

二、母液精准复溶

用1mL样本稀释液溶解标准品，枪头对准管底反复吸打5次助溶，轻柔涡旋混匀后，室温避光静置15-30分钟，待总胆固C溶解后短暂离心10秒，得到最高浓度母液S7，全程冰上放置避免降解。

三、8点倍比梯度配制

依次标记7支1.5mL离心管为S0-S6，每管精准加入‌250μL样本稀释液‌。

吸取250μL S7母液加入S6管，轻轻吹打混匀后更换全新枪头，从S6取250μL液体加入S5管，以此类推逐级倍比稀释，全程不能跨浓度跳级操作。

四、关键质控要点

每完成一个梯度稀释，必须更换新枪头，避免残留高浓度液体带入下一级，造成浓度偏差。

所有梯度配制完成后1小时内完成酶标板加样，禁止室温久放导致总胆固C氧化降解，影响标准曲线线性。

若试剂盒标注的总胆固C检测范围与上述梯度不符，以说明书指定的最高浓度为起点，按等体积倍比稀释规则调整即可。