在继续探讨MKN-45细胞，这一人低分化胃癌细胞系的操作步骤时，我们不得不强调其培养环境的精细调控对于细胞生长与实验结果的至关重要性。首先，确保培养基的配方精确无误，通常MKN-45细胞使用含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养基，这有助于提供细胞生长所需的营养成分和生长因子。
接下来，细胞的传代操作需谨慎进行。在无菌条件下，移除旧培养基，用预温的PBS轻轻洗涤细胞一至两次，以去除残留的培养基和死细胞。随后，加入适量含EDTA的进行消化，消化时间需根据细胞贴壁情况灵活调整，避免过度消化导致细胞损伤。待细胞边缘开始变圆，轻轻拍打培养瓶使细胞脱落，加入适量新鲜培养基终止消化，并通过移液管轻柔吹打形成单细胞悬液。
在细胞计数后，按照适当的比例将细胞悬液接种到新的培养瓶中，注意控制细胞密度，避免过密导致生长抑制或过疏影响细胞间的相互作用。接种后，轻轻摇晃培养瓶使细胞均匀分布，并置于37°C、含5% CO₂的恒温培养箱中继续培养。
此外，对于MKN-45细胞系的长期保存，可采用液氮冻存法。在细胞生长状态良好时，进行冻存前处理，包括消化、离心收集细胞，并使用含有DMSO的冻存液重悬细胞。随后，将细胞悬液分装至冻存管中，按照梯度降温的方式逐步放入4°C、-20°C、-80°C冰箱，最终转移至液氮罐中长期保存。
通过上述细致的操作步骤，我们可以有效维持MKN-45细胞的活性与稳定性，为后续的科学研究提供可靠的实验材料。
