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小鼠ELISA试剂盒的操作步骤是怎样的?

点击次数:395 更新时间:2023-07-13
 
  小鼠ELISA试剂盒是一种常用的实验方法,用于检测小鼠样本中特定蛋白质的浓度。下面是一般的小鼠ELISA试剂盒操作步骤:
 
  1、样本处理:
 
  a.收集小鼠组织或液体样本,如血清、血浆或细胞上清。
 
  b.将收集的样本置于离心管中,并离心10-15分钟以去除固体颗粒和细胞残渣。
 
  c.将上清转移到新的离心管中,避免带入沉淀。
 
  d.如有必要,将样本进行稀释,以确保其浓度处于试剂盒检测范围内。
 
  2、准备试剂:
 
  a.将试剂盒中的所有试剂和标准物品室温恢复至室温。
 
  b.打开并标记试剂瓶,以避免混淆。
 
  c.预先稀释试剂盒中的稳定洗涤缓冲液,按照说明书中的建议进行稀释。
 
  3、酶标板涂层:
 
  a.取出所需数量的酶标板,并用洗涤缓冲液洗涤。
 
  b.向每个酶标板孔中加入所需的涂层抗体或其他适当的试剂。
 
  c.封闭孔板,并在37°C下静置1-2小时,或根据说明书上的指导进行孵育。
 

小鼠ELISA试剂盒

 

  4、洗涤:
 
  a.将洗涤缓冲液加入洗涤缓冲液槽中。
 
  b.倒掉洗涤缓冲液槽中的液体,将酶标板孔倒置在纸巾上以排出残留液体。
 
  c.将每个孔部分填满洗涤缓冲液,然后轻轻拍打孔板以去除液体。
 
  d.重复以上步骤3次,确保充分洗涤。
 
  5、样本添加:
 
  a.向每个酶标板孔中加入已稀释的样本、对照标准品和负对照。
 
  b.封闭孔板,并在室温下孵育一段时间,按照说明书上的要求进行。
 
  6、洗涤:
 
  a.重复步骤4中的洗涤步骤,以去除未结合的物质。
 
  7、底物加入:
 
  a.向每个酶标板孔中加入底物溶液。
 
  b.封闭孔板,并在室温下进行孵育,按照说明书上的建议时间。
 
  8、停止反应:
 
  a.向每个酶标板孔中加入停止溶液,以终止化学反应。
 
  9、测量读数:
 
  a.使用酶标仪测量各个孔的吸光度值,一般为450nm或其他特定波长。
 
  b.将吸光度值与标准曲线进行比较,计算样本中目标蛋白质的浓度。
 
 
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