双链RNA结合蛋白Staufen2抗体的生wu素化标记实验要点:

1.  如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。因此,蛋白质在反应前要对 0.1mol/L碳suan氢钠缓冲液或0.5mol/L硼酸缓冲液充分透析;

2.所用的NHSB及待生wu素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同,选择不当则影响标记的效率,应先用几个不同的分子比来筛选最适条件;

3.用NHSB量过量也是不利的,抗原的结合位点可能因此被封闭,导致抗体失活;

4.由于抗体的氨基不易接近可能造成生wu素化不足,此时可加入去污剂如 Triton x-100, Tween20等;

5.当游离ε-氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时,或位于酶的催化位点时,生wu素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性;

6.生wu素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及ben酚基,也可与糖基共价结合;

7.交联反应后,应充分透析,否则,残余的生wu素会对生wu素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用;

8.在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素的本底低,但由于链霉亲和素含有少量正电荷,故对某些细胞可导致高本底。

小鼠细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 (mouse CTLA-4)

小鼠细胞色素P450(mouse Cytochrome P450)

小鼠C反应蛋白(mouse CRP)

小鼠CXC趋化因子受体3(mouse CXCR3)

小鼠CXC趋化因子配体16(mouse CXCL16)

小鼠CXCL1/KC(mouse KC)

小鼠环磷酸鸟苷(mouse cGMP)

小鼠睫状神经营养因子(mouse CNTF)

小鼠可溶性CD36分子(mouse sCD36)

小鼠sCD40配体(mouse sCD40 Ligand)

小鼠CD34(mouse CD34)

小鼠可溶性白细胞分化抗原40配体(mouse sCD40L)

小鼠补体C3a(mouse C3a)

小鼠补体C5a(mouse C5a)

小鼠血清总补体(mouse CH50)

小鼠肌酸激酶(mouse CK)

小鼠肌酸激酶同工酶(mouse CK-MB)

小鼠羟甲基赖氨酸(mouse CML)

小鼠C-肽(mouse C-peptide)

小鼠心肌钙蛋白T

小鼠粒细胞集落刺激因子(mouse G-CSF)