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腺病毒D型探针法荧光定量PCR试剂盒反应五要素

点击次数:747 更新时间:2022-03-29
 

腺病毒D型探针法荧光定量PCR试剂盒反应五要素:

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:

①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。

②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

人巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human MIP-1β (Macrophage Inflammatory Protein 1 Beta) ELISA Kit 

人调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human RANTES (Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted) ELISA Kit 

人单核细胞趋化蛋白3(MCP-3)酶联免疫吸附测定试剂盒Human MCP-3 (Monocyte Chemotactic Protein 3) ELISA Kit

人嗜酸粒细胞趋化因子(ECF/CCL11)酶联免疫吸附测定试剂盒Human ECF/CCL11 (Eosinophil Chemotactic Factor) ELISA Kit

人胸腺激活调节趋化因子(TARC)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TARC (Thymus Activation Regulated Chemokine) ELISA Kit

人巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α)酶联免疫吸附测定试剂盒Human MIP-3α (Macrophage Inflammatory Protein 3 Alpha) ELISA Kit 

人二级淋巴组织趋化因子(SLC)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SLC (Secondary Lymphoid Tissue Chemokine) ELISA Kit

人巨噬细胞来源的趋化因子(MDC)酶联免疫吸附测定试剂盒Human MDC (Macrophage Derived Chemokine) ELISA Kit

人髓样前体细胞抑制因子2(MPIF2)酶联免疫吸附测定试剂盒Human MPIF2 (Myeloid Progenitor Inhibitory Factor 2) ELISA Kit

人巨噬细胞炎性蛋白4α(MIP4α)酶联免疫吸附测定试剂盒Human MIP4α (Macrophage Inflammatory Protein 4 Alpha) ELISA Kit

人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human CTACK (Cutaneous T-cell Attracting Chemokine) ELISA Kit

人可溶性CD14分子(sCD14)酶联免疫吸附测定试剂盒Human sCD14 (Soluble Cluster of Differentiation14) ELISA Kit

人免疫球蛋白E Fc段受体Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human FcεRII/CD23 (Receptor II for the Fc Region of Immunoglobulin E) ELISA Kit


 
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