普氏立克次体(RP)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)准备试剂与收集血样：

双重核酸试剂盒（荧光PCR法）　1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。

2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。

3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。

4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）

检测程序：

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。

3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

6.  洗板：同前。

7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗处反应15 分钟。

8.  每孔加入100ul 终止液混匀。

9.  30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。

性能：

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2. 灵敏度：检测浓度小于0.1 U/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期：6个月

黑人Burkitt淋巴瘤细胞；RAJI

人B淋巴细胞瘤细胞；RAMOS

人B淋巴细胞瘤细胞；RAMOS(RA.1)

人脑瘤细胞；SF126

人脑瘤细胞；SF763

人脑瘤细胞；SF767

人皮肤黑色素瘤细胞；SK-MEL-1

人肾上腺皮质癌细胞；SW-13

人结直肠癌细胞；T84

人急性单核细胞白血病细胞；THP-1

人神经胶质细胞瘤细胞；U251

人组织细胞淋巴瘤细胞；U937 [U-937]

人胃腺癌细胞；BGC-823

人低分化肺腺癌细胞；GLC-82 [GLC82]

人喉癌上皮细胞；Hep-2

人纤维肉瘤细胞；HT-1080

人绒癌细胞；JEG-3

人耐VP16绒癌细胞株；JEG-3/VP16

白介素-2转染耐VP16绒癌细胞；JEG-3/VP16-IL-2

TNFa转染耐VP16绒癌细胞；JEG-3-VP16-TNFa

人急性T淋巴细胞白血病细胞；Jurkat, Clone E6-1

人神经母细胞瘤细胞；BE(2)-M17

人乳腺癌细胞；MDA-MB-157

人成骨肉瘤细胞；MG-63

人小细胞肺癌细胞；NCI-H446

人多发性骨髓瘤细胞；RPMI-8226 [RPMI8826]

人脑瘤细胞；SF17