荧光定量PCR试剂盒中的PCR:聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断。可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。PCR技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑。
荧光定量PCR试剂盒基本原理:先用随机引物将RNA反转录成cDNA,然后设计特异性的引物和荧光探针(TaqMan探针),进行荧光定量PCR检测。TaqMan探针是一种寡核苷酸探针,它设计为与日标序列上游引物和下游引物之间的序列配对。荧光基团连接在探针的5’末端,而淬灭剂则在3’末端。当完整的探针与日标序列配对时,荧光基材发射的荧光因与3’端的淬灭剂接近而被淬灭,但在进行延伸反应时,qTaq聚合酶的5’外切酶活性将探针进行酶切,使得荧光基团与淬灭剂分离,荧光强度得到检测。随着扩增循环数的增加,释放出来的荧光基团不断积累,因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系。
荧光定量PCR试剂盒产品特点:
1.无需优化反应和循环条件,快速构建反应体系。
2.高灵敏度检测,即使是低丰度的转录本也可以检测。
3.试剂盒确保DNA或cDNA模板的准确定量,适用于各种类型荧光定量PCR仪。
4.整合热启动酶的*PCR系统,*限度的避免非特异性扩增。