斑点气单胞菌PCR检测试剂盒使用步骤：
 

　　一、样品 DNA 的制备
 

　　1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
 

　　2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作：
 

　　3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液(足够 10 个样品)为例：在一干净塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但*在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
 

　　4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品(半粒芝麻大小)或 5uL 液体样品待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
 

　　5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。
 

　　6. 95℃保温 10 分钟。
 

　　7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。
 

　　二、弓形杆菌属通用PCR试剂盒 设置 PCR 反应(40 uL 体系)
 

　　8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例(注意：如果*次使用DNA 释放剂，*每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定*用量，以后就用效果*的那个模板用量)：
 

9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。
 

　　10. 电泳检测 PCR 产物。预期的 PCR 产物长度为 216bp。阳性对照必须有此条带出
 

　　现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，需要用通用引物(如真核生物专一 PCR 引物，需自备)测试是否有抑制剂或样品是否浓度达到 PCR 的要求，如果通用引物也扩不出来，需要浓缩并再次纯化 DNA 样品，或者更换 DNA 提取方法，直到通用引物能够扩增出预计大小的片段。