猫附红细胞体（猫嗜血支原体）探针法荧光定量PCR试剂盒定量分析描述操作步骤。
 

　　1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
 

　　2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同)。
 

　　3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
 

　　4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
 

　　5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
 

　　6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
 

　　7. 如果有N个样品，*设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
 

　　8. 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也以选购本公司的柱式病毒RNAout。本试剂盒免费赠送20次免RNA提取的核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为RT-PCR模板，省略了RNA提取步骤。
 

　　9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR 管，其中N+2个用于上步得到的 N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4 个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(用第4号管的阳性对照稀释液做模板)。
 

　　10. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后zui后加)