1、固相载体  

    可溶性抗原或抗体吸附于固相载体而成为不溶形式，这是进行酶标记测定的基本条件。许多物质可作为固相载体，但在elisa酶联免疫试剂盒中常用的是聚苯乙烯或聚氯乙烯微量反应板及塑料管。  

    每批制品在使用前，须经过实验室鉴定，鉴定的方法和标准是对每批购置的微量反应板或塑料管抽样，用0.2ug/ml纯化的正常人IgG进行包被，经洗涤后加酶标记抗人球蛋白进行反应，再经孵育洗涤，加底物显色终止反应后，逐孔在酶标比色计中测定其消光值、光密度（OD值）。  

    一般认为全板中每两孔间OD值的误差不超过10%为合格。如果中间孔与四周孔OD值相差太大，或者反应板的这一边与另一边凹孔的OD值相差大，均不合格。此外，还要检查阳性和阴性参考血清OD值是否有明显差别。一般要求有10倍左右的差异为合格。  

2、抗原  

    在ELISA中，包被于固相载体表面的抗原或抗体的来源和制备方法对试验结果都有影响。包被所用的抗原必须是可溶性的，且要求是和稳定的制剂，纯度和免疫原性要高。而且抗原包被固相载体除浓度外，对时间、温度、PH均有关系。  

    温度高（如37℃、45℃、或56℃），包被时间可缩短，温度低可延长包被时间。但为了方便起见，通常采用4℃包被过夜，可使抗原吸附得更加*且均匀。  

    在用聚苯乙烯或聚乙烯微量反应板或塑料管作固相载体时，在碱性条件下（如0.1mol/L、PH9.6碳酸盐缓冲液稀释抗原）4℃包被过夜较为合适。  

    但在某些试验中，如用LPS或毒素蛋白包被时，用PH7.2～7.4PBS稀释才是满意的。包被特异蛋白质的浓度为1～10ug/ml，而对某些病原微生物抗原以5～20ug/ml较为合适，但均应通过滴定。