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elisa试剂盒免费代测酶免方法技术中浓度的选择条件

点击次数:1156 更新时间:2017-06-20
 

在酶联免疫方法技术中,elisa试剂盒免费代测首先要确定的变异因素就是酶标记物的工作浓度。因为酶标记物浓度的很小的一个变化,便会导致整个试验结果产生很大的波动。另外,由于浓度过高,会使非特异性反应增加,而浓度过低又会影响测定的敏感性。因此,在正式准备试验前必须准确滴定其工作浓度,才能完善整个实验。

1. 酶标记抗体的滴定方法是:将抗原(或抗体)物理吸附于固相载体上,然后将经过一系列稀释的酶标抗体(或抗Ig抗体)与吸附在载体上的抗原(或抗体)起反应,以酶与底物的显色反应程度来确定酶标记抗体的效价,或称工作浓度。
2. elisa试剂盒免费代测其步骤为:先将抗原(或抗体)用0.05M PH9.6包被缓冲液稀释为10μg/ml左右,于聚苯乙烯板孔内加0.1ml,4℃一夜,次日以洗涤缓冲液洗涤3次。酶标记抗体用1%BSA-PBS液依次稀释成1:100,1:200,1:400,1:800,1:1600(根据据抗体的滴度而定),分别加入反应孔中,每个稀释度二孔,每孔0.1ml,37℃孵育1小时后洗涤。然后加底物液,每孔0.1ml,37℃10~30分钟。以2M H2SO4 0.05ml终止反应。
3. 结果判定主要是以ELISA比色仪(酶标仪)读取各孔的OD值,并以OD为纵座标,结合物浓度为横座标,绘制滴定曲线。由曲线上查得OD值为1.0左右,且曲线斜率时的酶标抗体稀释度,elisa试剂盒免费代测即为该标记物的工作浓度。

 
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