① TSZelisa试剂盒样品/标准品不正确稀释。
② 孵育时间/温度不正确。
③ 在孵育时为盖上酶联板覆盖物：在孵育时需盖上酶联板覆盖物，以防止液体蒸发或孵育期间的污染。每个试剂盒内均有足够数量的酶联板覆盖物。
④ 检测波长不正确：要保证分光光度剂的检测波长是正确的。
⑤ TMB底物的显色时间过长：请监控显色时间。说明书中所示的显色时间可能因为温度和其它检测条件的不同而稍有变化。
⑥ 样品不适合此检测：在TSZelisa试剂盒说明书中会列出每种产品的适用标本范围，超出范围的标本可能不适于此试剂盒或者检测条件需要摸索。
⑦ 样品/标准品污染：样品或标准品的污染可能会导致检测结果“溢值”。
⑧ 偶合试剂不正确稀释：要严格按照说明书来稀释偶合试剂，浓度过高会造成OD的“溢值”HRP偶合试剂的不正确稀释
⑨ 所用稀释液不对：只能使用相应试剂盒内的稀释液稀释样品和标准品。
找到问题原因后，解决问题就容易的多了。各位广大科研者们也是一样，在检测的时候一定要认真仔细，并严格按照要求来操作。实验前，对TSZelisa试剂盒说明书仔细的阅读。