牛白血病抗体ELISA试剂盒检查

  试剂盒的制备及评价利用纯化的gp51重组蛋白作为包被抗原研制了gp51-ELISA试剂盒，试剂盒主要成分包括：已包被抗原的96孔板、HRP标记的兔抗牛IgG和牛白血病阴性、阳性尺度血清。gp51重组蛋白的大量制备与纯化将本实验室已构建成功的含PET-32a-gp51表达载体的菌株复苏，在大肠杆菌BL21中大量诱导表达，收集菌体经超声波破碎，将包涵体通过Ni~(2+)亲和层析柱进行纯化，透析复性后用PAGE电泳检测，得到纯度较高的gp51重组蛋白。紫外光分光光度计检测，重组蛋白浓度为0.216mg/mL。对试剂盒进行了特异性、敏捷度、重复性及保留期试验，结果表明：试剂盒能特异地检测牛白血病阳性尺度血清，与牛传染性鼻气管炎、蓝舌病、牛病毒性腹泻和赤羽病等阳性尺度血清均无交叉反应；用该试剂盒对牛白血病阳性尺度血清进行检测，测定效价为1:256～1:512，敏捷度是AGIDT的4～8倍；重复性试验，试剂盒批内差异为1.35%～4.11%，批间差异为3.49%～9.54%,分别小于10%和15%；保留期试验，试剂盒-20℃保留期为6个月，4℃保留期为1个月。

  本研究在原有的研究基础之上展开，将已构建并经鉴定准确的PET-32a-gp51表达菌株复苏，在大肠杆菌BL21中大量诱导表达,通过纯化及复性后得到纯度高、免疫学活性好的gp51重组蛋白，参照已建立的间接gp51-ELISA方法，以此重组蛋白研制了检测牛白血病病毒抗体的间接gp51-ELISA试剂盒，并进行了试剂盒的评价及初步应用研究。地方流行性牛白血病(Enzootic Bovine leukosis,EBL)是由牛白血病病毒(Bovine leukemia virus,BLV)引起的以淋巴细胞持续性增生为特征的传染性肿瘤性疾病,主要发生于4～8岁的成年牛。因此自主高水平的检测试剂盒对该病的防制具有重要意义。目前我国使用的牛白血病检测试剂几乎全部来自国外，价格昂贵，检测本钱很高。该病几乎遍布*各养牛国家，在我国某些牛群中血清阳性率达30%～50%，已成为牛的重要传染病之一。