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基因组装配的方法

点击次数:593 更新时间:2015-05-28
 


近年来,DNA测序的通量显著增加,测序成本不断降低,但基因组装配仍面临着不小的挑战。现有技术一般是先通过测序得到DNA序列的短片段,ELISA试剂盒然后利用计算机方法将其组装成长片段,从而确定序列顺序并对目标序列进行研究。这样的装配相当于,要在不知道zui终图形的情况下,完成数百万片的拼图。如何将这些大量短片段有效组装起来,一直是基因组装配面临的一大难题。

现在,DOE JGI、PacBio公司和华盛顿大学合作,开发了一种改良版的基因组装配方法,文章于五月五日发表在Nature Methods杂志上。研究人员将枪法DNA文库与单分子实时DNA测序(SMRT技术)结合起来,对三种微生物基因组实现了高质量的从头装配。

该技术名为分级基因组装配HGAP,是一种“从DNA样品制备到完成基因组的全自动工作流程"。PacBio公司的单分子实时DNA测序平台,能够生成超长的测序读段,HGAP技术正是得益于此。

Sanger测序技术能够很好的覆盖测序中的缺口,ELISA试剂盒度非常高。传统的Sanger测序技术需要创建多个DNA文库,进行多次测序,并且要整合大量数据。目前人们往往将Sanger方法与其他测序技术结合起来,以便获得*化的结果,不过这样的方法一般仍然需要制备多个文库。研究人员指出,HGAP技术只需要制备一个枪法DNA文库,而且不需要用高精度的原始读段来进行校正。

ELISA试剂盒研究团队用DOE JGI之前测序过的三种微生物,对HGAP技术进行验证。他们将从头组装的结果与微生物的参考序列相比较,发现HGAP技术的装配结果度大于99.999%。

“我们一直在寻求新途径,希望帮助研究者们有效获得高质量的数据,"DOE JGI的Len Pennacchio说。DOE JGI参与了20%的基因组测序项目,包括微生物、植物、真菌、藻类等,大多集中在环境生物学、能源等领域。

 
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