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揭示半固体琼脂培养基促菌生长检查方法

点击次数:762 更新时间:2014-08-20
 

揭示半固体琼脂培养基促菌生长检查方法

  1.用于菌数计数的半固体琼脂培养基促菌生长(灵敏度)检查的方法:对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查(促菌生长检查)。取预先制备好的琼脂培养基平皿3~5个,用表面涂布法每块平板表面接种30~100个试验菌,同时用已知质量保证的同型号培养基平皿3~5个(如较的如MERCK,DIFICOL产品)做对照试验,待培养基表面的菌液被琼脂培养基吸干或风干后,将培养皿倒置于培养箱的使用温度下培养48~72小时,(也可采用浇碟法进行)取出培养后的平皿点计菌落数。样品培养基上的微生物数量应不得低于对照培养基上微生物生长数量的70%。否则,需重新检查,或该培养基被视为不符合促生长要求。

  2.用于控制菌检查的富集培养基的促菌生长(灵敏度)检查的方法:对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查。每100ml培养基内分别接入试验菌小于100cfu,每个菌种接种两瓶培养基,将接过种的培养基置于条件下培养。应在16~18小时后可明显观察到培养基内有微生物生长,则证明此培养基合格。

  原则上无论是采用脱水培养基还是按相关处方配制的培养基,一旦制成成品培养基,则应对每个配制批号培养基进行促菌生长(灵敏度检查)试验,以考察培养基的质量。按脱水培养基的批号做灵敏度检查是基于培养基的灭菌程序已经经过验证。

  如果实验室使用的是商购的成品培养基,供应商应随培养基提供相应批次的培养基质量检测报告,报告包括培养基的PH值、无菌检查结果和促菌生长(灵敏度)试验结果等项目。建议在使用某一新的成品培养基(新供应商或新培养基品种)时,应至少考察三个不同批次的培养基质量,只有三批质量均合格方可使用该培养基。微生物限度检查用成品培养基一旦初试确认合格后,可审查供应商的质检报告,而不必每批再作无菌检查和灵敏度检查,但半年应至少检查一次,以复核其质量。用于无菌检查试验的每批培养基,均必须按规定进行灵敏度检查试验,此规定同样适用于实验室自行配制的培养基。

  建议在正式使用前即应完成对培养基的质量检查。如果在进行灵敏度试验的同时,也使用该培养基进行样品检查,那么,一旦培养基的无菌性或灵明度不符合规定,则检验结果应无效。无论这些质量控制检查试验何时完成,实验室都必须在相关产品放行之前或检验报告发出之前,对所用培养基的无菌性及灵敏度试验资料的完整性和合格予以确认。

  灵敏度(促生长)检查试验用菌悬液,可用标准菌种制得,也可向具备适当资质的供应商购买。目前市场上的商用产品,如REMEL公司的培养基质量Quanti-cultR检查用菌种,小瓶内每片薄膜上含有10~100CFU。此类产品使用简单,但操作者需严格遵守供应商的使用要求。另外,尽管所购试菌种均附有质量证书,正式使用前,仍必须用倾注平皿法或铺表面法等标准检测方法对菌悬液的微生物数量进行复核确认。

 
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