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培养基研究促细胞分裂剂实验说明

点击次数:738 更新时间:2014-08-05
 

培养基研究促细胞分裂剂实验说明

  通过促细胞培养基分裂剂与细胞表面受体相互作用,在体外触发细胞的多克隆激活。根据所使用的促细胞分裂剂的不同,应答细胞可以是T淋巴细胞、B淋巴细胞,或两者同时,或者是单核细胞。细胞激活可以通过细胞增殖、细胞因子分泌、表面抗原表达和/或细胞体积的增加进行检测。例如在使用B细胞激活剂时,可以通过多克隆免疫球蛋白的分泌进行检测。

  操作步骤:

  (一)促细胞分裂剂制备

  根据说明书将促细胞培养基分裂剂重新溶解于水或培养液中,制成储存液(如100´),保存于-20℃。

  (二)促细胞分裂剂滴定

  1.在培养液中稀释储存液到所需的*个浓度,通常为理论*浓度的10倍;

  2.在培养基板或试管中直接将促细胞分裂剂进行浓度递减系列稀释(100 μl/孔);

  3.每孔平行重复三次;

  (三)细胞激活

  1.分离外周血单核细胞培养基

  2.室温下用培养液300´g离心10分钟,收集并洗涤细胞;

  3.计数细胞并将细胞在培养液中重新悬浮至106细胞/ml,在培养板中每孔加入100μl;

  4.在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育(细胞增殖需2-3天;细胞因子测定测定6小时-2天;免疫球蛋白分泌测定需5-10天);

  (四)细胞激活定量测定方法

  1.培养基增殖检测方法采用MTT测定法;

  2.细胞因子分泌测定或使用市售商业化试剂盒;

  3.免疫球蛋白分泌测定采用ELISA检测

 
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