1.血液的收集及洗涤
将血液收集在含有抗凝剂的容器中，每30mL 血液加约5mL 肝素－pH7.4等渗磷酸盐缓冲溶液。
为避免膜上含有的或膜上吸附的蛋白酶使培养基膜蛋白发生变化，以下操作应在－4℃低温下进行。取30mL血液，于冷冻离心机(4℃)中3000r/min 离心20min，使红细胞沉淀，用吸管吸尽血浆及沉淀的红细胞表层的绒毛状沉淀层，以避免其他类型细胞的混入。
将红细胞置于3倍量预冷的pH7.4等渗磷酸盐缓冲液中，用玻璃棒缓慢地搅拌悬浮，4℃5000r/min离心15min，除去上清液及沉淀表层，重复洗涤3次。
2.溶血和红细胞膜的洗涤
在洗净的红细胞中，按照1:40的比例加入预冷的10mmol/LpH7.4低渗Tris(三羟甲基氨基甲烷)－HCl 缓冲液，边加边缓慢搅拌，置于4℃冰箱中1～2h，使之完成溶血。然后于4℃9000r/min 离心15min，使红细胞膜沉淀。重复洗涤、离心3～5次，zui后获得白色的红细胞膜样品。
注意：①溶血时低渗缓冲液的用量越大，培养基红细胞膜中血红蛋白的残留量越少，但体积大，离心费时间。因此，红细胞与缓冲液的容量比例，以1:40为宜。②膜的重量很轻，在溶血后离心倾倒上清液时容易流走，因此要特别小心，尽可能防止膜的损失。③在制备过程中，若pH 值降低，残留的血红蛋白会迅速增加。当pH 保持在7.4时，红细胞膜中的血红蛋白含量仅占总蛋白量的3~5％，相当于血液中总血红蛋白的0.1％。但pH 值降低至7.0时，血红蛋白增加至20％。④上述方法适用于大白鼠和人红细胞膜的分离。牛、猪等红细胞膜的制备，若反复进行低渗处理，将造成膜外表面包含具有乙酰胆碱酯酶活性的酯蛋白脱落，使膜容易破碎，得不到较完整的膜样品。若在低渗缓冲液中加入1mmoL氯化钙，即可*防止这种膜的不稳定性。
将zui后一次离心所得到的红细胞培养基膜悬浮在2～4mLpH7.4等渗磷酸盐缓冲液中。记录悬浮液的总体积。注意，有时在膜的下面有少许未解体的红细胞残留物，不要将这部分残留物悬浮在缓冲液中。
3.细胞膜的镜检
取少量膜样品悬液，在相差显微镜下进行观察，确定膜制品是否纯净。在视野中纯净的膜为扁圆形，白色，膜表面赂有皱纹。在视野中应不含有完整的红细胞或污染的细菌。
4.膜的冷冻干燥
培养基样品放在一个称好重量的(在分析天平上准确称量)小称量瓶中，冷冻干燥至样品全干(冰冻干燥可以过夜，冷冻干燥的样品更易溶于SDS 溶液中)，称量带有冷冻干燥制品的小称量瓶，记录膜的产量。
将冷冻干燥的膜制品，置于干燥器中保存，以备膜结构成分的分析。
