研生试剂-人白三烯C4 ELISA试剂盒的组成

一、人白三烯C4 ELISA试剂盒试 剂 组 成
1、精密度微孔板Microtest Plates 96 wells            2、酶标偶合液Enzyme Conjugate   12.0ml
3、标准品Standard 　5 x 1.0ml                     4、呈色剂A、Substrate  A  6.0ml
5、呈色剂B、Substrate B  6.0ml                   6、终止液Stop Solution  6.0ml   
7、浓缩洗涤液（1：20）Rinsing Buffer 60.0ml        8、5倍样品稀释液  dilution 15.0m
二、注 意 事 项
人白三烯C4 ELISA试剂盒为体外检测试剂，效期内使用，试剂应视为传染物，不同总批号的试剂不能混用。
使用前应将盒内各试剂取出，室温放置至少30分钟。
保存于2-8℃，请勿冷冻，有效期请见盒内标示。
浓缩洗涤液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟
三、操 作 步 骤
每孔分别加入已稀释的样品、标准品各100ul。
将板置于37℃温育30分钟。
甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干。重复操作5次。
每孔加入酶标偶合液100ul。
将板置于37℃温育30分钟。
甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干。重复操作5次。
每孔加底物A、底物B各50 ul，置37℃恒温箱反应15分钟。
8．每孔加终止液50ul，于450nm波长读O.D.值。
四、结 果 判 断
仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值。
检测值范围：0 – 400pmol/L
人白三烯C4 ELISA试剂盒敏感度： 1.0 pmol/L

自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
在450nm波长处测定各孔的OD值。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。
试剂盒性能
1. 灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
人肥大细胞类胰蛋白酶(MCT) ELISA试剂盒结 果 判 断 与 分 析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的MCT标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的MCT含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围：0-4.0ng/ml
4、敏感度： 0.01 ng/ml