磷酸钙法转染HEK293T细胞
实验材料 293T细胞
试剂、试剂盒 无菌水ddw NaCl KCl Na2HPO4 glucose HEPES CaCl2
仪器、耗材 Eppendorf管 培养皿 培养箱
一.试剂配制

无菌水ddw： 高温灭菌； 分装；

2XHBS： 280mM NaCl

10mM KCl

1.5 mM Na2HPO4

12 mM glucose

50 mM HEPES

Adjust the pH , every 0.05pH from 7.00 to 7.45 using 10N NaOH, then add ddw. to the final volume. 过滤灭菌，分装；

2M CaCl2： 过滤灭菌，分装。

二. 实验过程：

1. 铺细胞： 选择状态良好的293T细胞传代， 2-3x105个细胞/35mm dish。

2. 20-24h后，待细胞长至铺满瓶底约50-70%的时候，进行转染。下面就35mm dish为例，采用以下转染体系：

ddw： 105ul

plasmid： 2 ug （如0.5ug/ul， 即用4ul）

2M CaCl2： 16.5ul

2XHBS： 125ul

按上述顺序，往eppendorf管中依次加入上述四种试剂。

先将前三者混匀， zui后加2XHBS。

一种方法是，加2XHBS时要逐滴加入， 吹打至微现乳白色， 立即均匀滴入培养皿，轻轻摇匀后置于培养箱中，6-8h后换液。

另一种方法是， 加入2XHBS后立即吹打约40下（不过这个要根据每个人的力道和吹打的频率而定， 建议做一个梯度实验，吹打不同的次数看哪次的转染效率高以后就按这个次数来吹打）， 之后步骤同上， 立即均匀滴入培养皿，轻轻摇匀后置于培养箱中，6-8h后换液。

磷酸钙法转染HEK293T细胞