动物双歧杆菌菌种传代

微生物菌种的培养：

⒈ 孢子制备

⑴ 孢子的制备

一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产孢子的营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1％，氮源不超过0.5％)，碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境，不利于形成，氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下，干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。面的培养温度大多数为28 ℃，少数为37 ℃，培养时间为5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制备　

霉菌的孢子培养，一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖，而且这类培养基的表面积较大，可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25～28 ℃，培养时间为4～14天。

⒉ 种子制备

⑴ 摇瓶种子制备　

摇瓶种子进罐，常采用母瓶、子瓶两级培养，有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和*，并易被菌体分解利用，氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓，子瓶培养基浓度比母瓶略高，更接近种子罐的培养基配方。

产品名称：动物双歧杆菌
货号：YS-01J13438
拉丁文: Bifidobacterium animalis

提供形式: 冻干物

安全等级: 1

模式菌株: yes

应用领域: 分类学研究。

培养基: BBL液体培养基：蛋白胨 15.0g,葡萄糖 20.0g，酵母浸膏 2.0g，可溶性淀粉 0.5g，氯化钠 5.0g，L-半胱氨酸 0.5g，番茄浸粉 5.0g，肝浸粉 2.0g，吐温80 1.0g，蒸馏水1L，pH6.6-7.0。115℃，20min。

生长条件: 37℃，厌氧

存储条件: -80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

公司产品仅用于科研培养及打管说明：

1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。

2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。

3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长

4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。

5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。

保存方法：

传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙 。

液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。

悬液保存法：

① 蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

② 糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。

常用的冷冻保存法：

① 低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是适用范围*的微生物保存法。

微生物培养方法：

1、平板划线分离法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落。

2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。

上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的，但平板划线分离法不能对菌落计数，而稀释涂布平板法培养过程复杂，对平板的要求比较高，可参照以下步骤：

a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃，向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均匀，然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿，轻轻摇动培养皿，使培养基溶液均匀分布在培养皿底部，待培养基溶液凝固后即得平板培养基。

b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g，放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇15～20min混合均匀，用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，制成活性污泥混合液。

c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培养基表面的中央位置，用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。

兔VI型胶原(COL6) 心钠素Ⅱ，大鼠，小鼠，兔血小板衍化生长因子γ抗体

兔肽基精氨酸脱亚氨酶IV(PADI4)心钠素Ⅲ，大鼠血小板47蛋白抗体

兔新蝶呤 (Neopterin) 带3蛋白质（547-553），人相关血浆蛋白A2抗体

兔白分化抗原CD4(CD4) 带3蛋白质（824-829），人血浆谷氨酸羧肽酶抗体

兔上皮中性粒活化肽78(ENA-78) 碱性成纤维生长因子磷酸化肿瘤抑制基因P53抗体

兔β内酰酶抑制剂(BLI) 大内皮素-1（1-38），人扑克蒙蛋白抗体

兔T受体(TCR)大内皮素-1 （1-39），猪癌易感基因相关蛋白2

兔皮肤T淋巴相关抗原(CLA/CTAGE) 脑钠素-32，大鼠细小清蛋白抗体

兔皮肤桥蛋白(DPT) 铃蟾肽磷脂酰肌聚糖A抗体

兔斑型POZ蛋白(SPOP)缓激肽原钙粘蛋白11抗体

兔抗肌动蛋白抗体(AAA) 缓激肽（1-5）P选择素糖蛋白配体1抗体

兔微管关联蛋白(MAPτ)缓激肽（1-6）蛋白激酶N2抗体

兔骨骼肌慢肌肌钙蛋白T(TNNT1)缓激肽（1-7）G蛋白偶合受体激酶2抗体

兔16α羟基雌酮1(16-α OHE-1) 颊肽早期发育调控蛋白2抗体

兔白介素9(IL-9)磷酸酶，鸡磷酯酶Cβ3

兔神经调节蛋白4(NRG-4)降钙素，人血小板源性生长因子A抗体
动物双歧杆菌菌种传代鼠伤寒沙门氏菌血小板活化因子抗体

栗疫菌蛋白酶激活受体-1抗体

假单胞菌蛋白酶激活受体-2抗体

利古里亚游动放线菌蛋白酶活化受体4抗体

酿酒酵母多腺苷二磷酸多聚酶抗体/多聚ADP-核糖聚合酶1

猪布鲁氏菌配对盒基因3抗体

蜡状芽孢杆菌配对盒基因8抗体

酿酒酵母配对盒基因9抗体