荧光染料的优点: 产品仅用于科研使用简便; 可以与任何PCR产物结合; 价格便宜; 荧光染料的缺点: 不能区分不同的双链DNA 引物二聚体会影响检测的敏感性 非特异性产物会影响结果的敏感性 引物二聚体和非特异性扩增问题可以通过熔解曲线 (Melting curve) 进行识别,进而通过PCR引物的设计和反应条件的优化得以解决。总的来说,SYBR Green I方法是一种最基础也的Real-time qPCR实验手段。 特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途! 产品名称 | 牛布鲁氏杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Brucella bovis | 货号 | YSP96475 |
荧光探针: Real-e qPCR中的荧光探针为TaqMan探针,其基本原理是依据目的基因设计合成一个能够与之特异性杂交的探针,该探针的5'端标记荧光基团,3'端标记淬灭基团。 正常情况下两个基团的空间距离很近,荧光基因因淬灭而不能发出荧光。PCR扩增时,引物与该探针同时结合到模板上,探针的结合位置位于上下游引物之间。 当扩增延伸到探针结合的位置时,Taq酶利用5'外切酶活性,将探针5'端连接的荧光分子从探针上切割下来,从而使其发出荧光。检测到的荧光分子数与PCR产物的数量成正比,因此,根据PCR反应体系中的荧光强度即可计算出初始DNA模板的数量。 TaqMan探针技术解决了荧光染料与非特异性扩增结合的问题,反应结束后无需通过熔解曲线检测,缩短了实验时间。 TaqMan探针技术的优点: 荧光背景低; 敏感性高; 杂交稳定性高; 荧光光谱分辨率好; 特异性高。 TaqMan探针技术的缺点: 成本高; 设计难度大; 只能用于检测产物长度低于150bp的反应。 由于TaqMan探针的高特异性,可用于等位基因的辨别,特别适用于人类基因多态性以及根据SNP区别和定量菌株。
荧光定量PCR原理: 产品仅用于科研荧光定量PCR最早称TaqMan PCR,后来也叫Real-Time PCR,是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理:随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。 一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段, PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念:荧光阈值和 CT值。 哲纳尔氏染色素Secretagogin (D4V1Y) XP® Rabbit mAb硝-2-磺酸
蛋白激酶仰制剂KT5823(>97%(HPLC),BC)Secretagogin (D4V1Y) XP® Rabbit mAb1-庚烷 L-阿拉伯糖(>98%,BR)Myc-Tag (71D10) Rabbit mAb (HRP Conjuga)2-(2-乙氧基氧基)溴乙烷 L(-)-二甲酰一水(>98%,BR)Di-Methyl-Histone H3 (Lys27) (D18C8) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)二乙二单乙基 糖酸(>98%,BC)Phospho-Prdx1 (Tyr194) (D1T9C) Rabbit mAb2-啉基-氯-5-溴吡啶 L-氨基酸氧化酶T7-Tag (D9E1X) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)乙酸薄荷酯 L-氨基酸氧化酶Stat3 (D3Z2G) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)溴-甲 乙酸镧五水(>99%,BR)Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb (HRP Conjuga)溴化镍(II)三水合物 L-刀豆氨酸硫酸盐(>98%,BR)Acetyl-Histone H3 (Lys9) (C5B11) Rabbit mAb (HRP Conjuga)氯代二酸二乙酯 左旋肉盐酸盐(>98%,BR)Phospho-Doublecortin (Ser334) (D11B10) Rabbit mAb3,5-二氯-氟溴 左旋肉盐(>99%,BR)Acetyl-Histone H3 (Lys27) (D5E4) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)5-氯-2- 式醋酸铅B7-H3 (D9M2L) XP® Rabbit mAb2,5-二氯吡啶- 酸铅一水(II)(>98%,BC)B7-H3 (D9M2L) XP® Rabbit mAb2-基丁酸 氟化铅(>99%,BC)Stat3 (D3Z2G) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)5-羧酸尿嘧啶 化铅(>98%,BR)Lyric/Metadherin (D5Y8R) XP® Rabbit mAb甲-2,5-二硫酸盐 黄色氧化铅(>99%,BC)Lyric/Metadherin (D5Y8R) XP® Rabbit mAb1,1,1-三氟-基酮 硬脂酸铅SUMO-2/3 (18H8) Rabbit mAb (HRP Conjuga)偶氮二咪唑啉基烷 硫酸铅(>99%,BC)ETS-1 (D8O8A) Rabbit mAb氯-2-氟肼盐酸盐 牛布鲁氏杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒分泌粒蛋白1(嗜铬粒蛋白B)(CHGB/SCG1)ELISA试剂盒Hck 造血细胞激酶抗体20 ul 分泌成分(SC)ELISA试剂盒HCFHrp/BTA 膀胱肿瘤抗原抗体100 ul 肺炎支原体抗体(MP-Ab)ELISA试剂盒HCN4 环化核苷酸调控阳离子通道蛋白亚型4100 ul 肺炎衣原体抗原(Cpn)ELISA试剂盒HCV-Core 丙型肝炎病毒-C区抗体100 ul 肺炎衣原体抗体IgM(Cpn-IgM)ELISA试剂盒ACY 3/HCV-HCBP1 丙型肝炎病毒核结合蛋白-1抗体100 ul 肺炎衣原体抗体IgA(Cpn-IgA)ELISA试剂盒HCV-NS1 丙型肝炎病毒-NS1抗体5 mg 肺炎衣原体抗体(Cpn-Ab)ELISA试剂盒HCV-NS3 丙型肝炎病毒-NS3抗体100 ul 肺炎衣原体(Cpn)抗体(IgG)ELISA试剂盒HCV-NS4a 丙型肝炎病毒-NS4a抗体100 ul 肺特异性X蛋白(LUNX)ELISA试剂盒CD36L1/SRB1 高密度脂蛋白受体/清道夫受体抗体5 mg PCR技术的定量原理: 扩增曲线 在Real- qPCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测并记录其荧光信号,随着反应的进行,监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线,即为扩增曲线。荧光扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。 在Real-time qPCR扩增早期,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化,此时即为基线期。 PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数形式增加的,随着反应循环数的增加,最终PCR反应不再以指数形式生成模板,从而进入“平台期”。在该时期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR的终产物量与起始模板量之间无线性关系,所以根据最终的PCR产物量不能计算出初始模板量。 |