样品RNA的抽提: ①产品仅用于科研取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。 ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA质量检测 1)紫外吸收法测定 先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。 ① 浓度测定 A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。 产品名称 | 牛疱疹病毒通用探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Bovine Hepervirus (BoHV) | 货号 | YSP96461 |
实验过程: 一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 荧光定量PCR试剂盒技术: 本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。 客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。 基-2-乙酰氨基-2-脱氧-b-D-葡萄糖苷(>99%,BC)Phospho-4E-BP1 (Thr70) (D7F6I) Rabbit mAb十二烷基 -Α-L-吡喃海藻糖苷(>98%,BC)Phospho-p90RSK (Ser380) (D5D8) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-溴-3,3,三氟 基-beta-D-葡萄糖酸苷(>98%,BC)KHSRP (E2E2U) Rabbit mAb1-溴-氟-5- 肼(>98%,BC)Nogo-A Antibody2,8-二氯喹啉-甲 酮(>98%,BR)CD9 (D3H4P) Rabbit mAb紫苏 无毒型核酸染色剂Phospho-Rad17 (Ser635) (D6K9P) Rabbit mAb1H-吲唑-6-羧酸 5,5-二甲基-1,环己二酮Enolase-1 (D2S1A) Rabbit mAbN,N'-二(2-氨乙基)-1,二 5-氟胞苷(>98%,BR)GATA-3 (D13C9) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)2-氨甲基-(氟苄基)吗啉 骈三氮唑(>98%,BR)SimpleChIP® Human NR1D1 Promor Primers5-二并环庚酮 5-甲基吲哚(>98%,BR)Munc18-1 (D4O6V) Rabbit mAb1-氯-2-三氟甲氧基 5-硝基愈创木酚(植物激素级)CNOT6 (E1L8F) Rabbit mAb二(乙酰酮基)钛酸二异酯 6-溴-2-萘酚(>98%,BR)PTMScan® Acetyl-Lysine Motif [Ac-K] Kit9,9-二甲基氧杂蒽 6-(γ,γ-二甲基基氨基)嘌呤核苷(植物激素级)Rev-Erbα (E1Y6D) Rabbit mAb(S)-N-苄氧羰基-氨基-基-1- 6-甲基(>98%,BR)E-Tag Antibody2-甲基吡咯烷 7-氨基头孢烷酸SSRP1 (E1Y8D) Rabbit mAb1-BOC-羟甲基哌 8-羟基喹哪啶(>98%,BR)Choline Kinase α (D5X9W) Rabbit mAb氨基甲酸甲酯 9,10-二溴蒽(>98%,BR)PHGDH Antibody甲酰基吲哚酸-1-羧酸 T-丁基酯 双酚芴(>98%,BR)Focal Adhesion Proin Antibody Sampler Kit3,5-吡唑二甲酸 牛疱疹病毒通用探针法荧光PCR检测试剂盒骨桥素(OPN)ELISA试剂盒GFR Alpha-1 GDNF家族受体α-1抗体100 ul 骨膜蛋白/成骨细胞特异性因子2(POSTN)ELISA试剂盒GHR 生长激素受体抗体100 ul 骨胶原交联(Cr)ELISA试剂盒Ghrelin 脑肠肽抗体20 ul 骨性酸酶(BALP)ELISA试剂盒GHRF/GHRH 生长激素释放激素抗体100 ul 骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA试剂盒ID1 DNA结合抑制因子1抗体100 ul 骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA试剂盒GIG8/ID2 DNA结合抑制因子2抗体500 ul 骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)ELISA试剂盒GIP 胃泌素抑制肽抗体100 ul 骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA试剂盒TNFRSF18 糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体抗体100 ul 骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒Glasses Snake poison Proin 兔抗眼镜蛇蛇毒蛋白抗体(眼镜蛇)100 ul |