乳酸乳球菌说明书

微生物菌种的培养：

⒈ 孢子制备

⑴ 孢子的制备

一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产孢子的营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1％，氮源不超过0.5％)，碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境，不利于形成，氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下，干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。面的培养温度大多数为28 ℃，少数为37 ℃，培养时间为5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制备　

霉菌的孢子培养，一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖，而且这类培养基的表面积较大，可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25～28 ℃，培养时间为4～14天。

⒉ 种子制备

⑴ 摇瓶种子制备　

摇瓶种子进罐，常采用母瓶、子瓶两级培养，有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和*，并易被菌体分解利用，氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓，子瓶培养基浓度比母瓶略高，更接近种子罐的培养基配方。

产品名称：乳酸乳球菌
货号：YS-01J13056
拉丁文: Lactococcus lactis

提供形式: 冻干物

安全等级: 1

模式菌株: no

应用领域: 乳酸菌素

培养基: 营养肉汁培养基-2：牛肉膏 10.0g，蛋白胨 5.0g，NaCl 5.0g，酵母膏5g，葡萄糖5g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。pH7.0。121℃，15min。

生长条件: 28℃，好氧。（37微好氧）24h

存储条件: 真空冷冻干燥法

公司产品仅用于科研培养及打管说明：

1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。

2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。

3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长

4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。

5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。

保存方法：

传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙 。

液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。

悬液保存法：

① 蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

② 糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。

常用的冷冻保存法：

① 低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是适用范围*的微生物保存法。

微生物培养方法：

1、平板划线分离法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落。

2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。

上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的，但平板划线分离法不能对菌落计数，而稀释涂布平板法培养过程复杂，对平板的要求比较高，可参照以下步骤：

a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃，向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均匀，然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿，轻轻摇动培养皿，使培养基溶液均匀分布在培养皿底部，待培养基溶液凝固后即得平板培养基。

b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g，放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇15～20min混合均匀，用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，制成活性污泥混合液。

c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培养基表面的中央位置，用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。

PACAP R1  腺苷酸环化酶激活肽受体1抗体转录因子E2F二聚体蛋白2抗体

PABP (Methyl Arg455/460)  甲基化多聚腺苷酸结合蛋白抗体TIP30蛋白抗体

PABP  多聚腺苷酸结合蛋白抗体酪蛋白硫酸转移酶1抗体

P95/NBS1  DNA修复蛋白NBS1抗体Toll样受体5抗体

p95 NBS1/Cell cycle regulatory protein p95  周期调节蛋白P95抗体跨膜和泛素样结构域蛋白1抗体

P73 protein  P73肿瘤抑制基因抗体磷酸化翻译控制肿瘤蛋白抗体

p73 alpha  p53相关蛋白P73α抗体磷酸化调节染色体组装激酶1抗体

p70 S6 Kinase Beta 2/P70 Beta 2  核糖体S6蛋白激酶β2抗体肿瘤抑素抗体

p70 S6 kinase beta  核糖体蛋白S6激酶1抗体转录因子Tbx3抗体

p70 S6 kinase alpha  磷酸化核糖体p70 S6蛋白激酶抗体磷酸化酪氨酸羟化酶抗体

P63 protein/P51A  P63 肿瘤抑制基因抗体转录因子3抗体（螺旋环螺旋蛋白HE47）

p58ipk  p58ipk抗体磷酸化转录因子3抗体

p55/DCAF1  染色质组装因子1P55抗体磷酸化转录因子3抗体

p53R2/RRM2B  核苷酸还原酶M2B抗体T介导的转录调节因子Tbx21抗体

p53BP1/53BP1  p53结合蛋白1抗体磷酸化酪氨酸激酶A抗体
乳酸乳球菌说明书大肠杆菌谷胱甘肽过氧化酶2抗体 Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside 质量规格：HPLC≥98%，标准品

康氏木霉谷胱甘肽过氧化酶7抗体 Isoalantolactone 质量规格：HPLC≥98%，标准品

苍白盐八叠球菌谷胱甘肽S转移酶α1抗体 Isolinderalactone 质量规格：HPLC≥98%，标准品

根瘤菌谷胱甘肽S转移酶κ抗体 VRT-752271.HCl 质量规格：>98%,盐酸盐形式,蛋白激酶抑制剂

荧光假单胞菌半乳糖激酶1抗体 Obatoclax Mesylate;GX15-070 质量规格：≥98%,Bcl-2拮抗剂

运动节杆菌糖原蛋白2抗体 Icaritin 质量规格：HPLC≥98%，标准品

酿酒酵母磷酸半乳糖尿苷酸转移酶1抗体 Ginkgolide A 质量规格：HPLC≥98%，标准品

皮状丝孢酵母糖原蛋白1抗体 Ginkgolide B 质量规格：HPLC≥98%，标准品